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NRPB57L Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:2777

品  名:Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

英文名:Nickel Nitrilotriacetic acid NUPharose Fast Flow, Ni-NTA NUPharose FF

目录号:NRPB57L、NRPB57S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 25℃

保质期:5年


相关介绍: 

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质,通过活化偶联次氮基三乙酸(NTA),再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比,具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性,如样品中含有1-10mM EDTA或1-10mM β-巯基乙醇或5mM DTT,可正常纯化;在螯合镍的情况下,也可以用0.1M NaOH清洗。


Ni-NTA琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质,结合了His-Tag重组蛋白的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。


技术指标:

基质

4%琼脂糖凝胶

配基

-N(CH2COOH)3

配基密度

15 μmol/ml

填料粒径

60~180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

50-100 cm/h

pH稳定性

pH 5-12pH 3~13

0.3 MPa

载量

20 mg His-tag重组蛋白/ml 


使用方法:

1、色谱柱装填

(1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

(2)在柱子下端加入蒸馏水,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的蒸馏水。

(3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降。

(4)柱压不超过0.3MPa,如果装柱系统中无法测柱压,则正常流速下填装。

(5)填装好的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡,建议流速100cm/h,平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化。

2、上样

(1)缓冲液选择:一般选用pH6-8的结合缓冲液,常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用。在初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF,推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液。

(2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致,可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

3、洗脱

(1)Ni-NTA琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。

(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH。

(3)在初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF,不知道洗脱的咪唑浓度,建议在结合缓冲液中分别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑,浓度从低到高,分别洗脱和收集,通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。

(4)有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱,确定较佳洗脱条件。

4、在位清洗

在多次使用后需要在位清洗,常用方法为先5个柱体积蒸馏水清洗,再用1-3个柱体积50mM NaOH清洗10-20min,立即用5个柱体积结合缓冲液(50mM PBS)清洗平衡。

导购指南

中文名

英文简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF重力预装柱

Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

NRPB57S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB57S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB57S-Z15

1*5mL

1*5mL

NRPB57S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF中压预装柱

Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

NRPB57S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB57S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB57S-Y15

1*5mL

1*5mL

NRPB57S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

Ni-NTA NUPharose FF

NRPB57L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB57L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB57L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB57L-500

500ml

1瓶*500ml

注:天博生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积



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